ਮੋਮਬੱਤੀ ਅਤੇ ਸਾਬਣ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਸ਼ੁੱਧ ਸਪੋਸ਼ਨਿਕੋਵੀਆ ਡਿਵਾਰੀਕਾਟਾ ਤੇਲ, ਥੋਕ ਡਿਫਿਊਜ਼ਰ ਜ਼ਰੂਰੀ ਤੇਲ, ਰੀਡ ਬਰਨਰ ਡਿਫਿਊਜ਼ਰ ਲਈ ਨਵਾਂ

ਛੋਟਾ ਵੇਰਵਾ:

 

2.1. SDE ਦੀ ਤਿਆਰੀ

SD ਦੇ ਰਾਈਜ਼ੋਮਜ਼ ਨੂੰ ਹੈਨਹਰਬ ਕੰਪਨੀ (ਗੁਰੀ, ਕੋਰੀਆ) ਤੋਂ ਸੁੱਕੀ ਜੜੀ-ਬੂਟੀ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਖਰੀਦਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਕੋਰੀਆ ਇੰਸਟੀਚਿਊਟ ਆਫ਼ ਓਰੀਐਂਟਲ ਮੈਡੀਸਨ (KIOM) ਦੇ ਡਾ. ਗੋ-ਯਾ ਚੋਈ ਦੁਆਰਾ ਪੌਦਿਆਂ ਦੀ ਸਮੱਗਰੀ ਦੀ ਵਰਗੀਕਰਨ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਇੱਕ ਵਾਊਚਰ ਨਮੂਨਾ (ਨੰਬਰ 2014 SDE-6) ਸਟੈਂਡਰਡ ਹਰਬਲ ਰਿਸੋਰਸਿਜ਼ ਦੇ ਕੋਰੀਅਨ ਹਰਬੇਰੀਅਮ ਵਿੱਚ ਜਮ੍ਹਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। SD (320 ਗ੍ਰਾਮ) ਦੇ ਸੁੱਕੇ ਰਾਈਜ਼ੋਮਜ਼ ਨੂੰ 70% ਈਥਾਨੌਲ (2 ਘੰਟੇ ਰਿਫਲਕਸ ਦੇ ਨਾਲ) ਨਾਲ ਦੋ ਵਾਰ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ ਐਬਸਟਰੈਕਟ ਨੂੰ ਘੱਟ ਦਬਾਅ ਹੇਠ ਕੇਂਦਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਡੀਕੋਸ਼ਨ ਨੂੰ ਫਿਲਟਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਅਤੇ 4°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਕੱਚੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਮੱਗਰੀ ਤੋਂ ਸੁੱਕੇ ਐਬਸਟਰੈਕਟ ਦੀ ਪੈਦਾਵਾਰ 48.13% (w/w) ਸੀ।

 

2.2. ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਉੱਚ-ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ (HPLC) ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ

ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫਿਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਇੱਕ HPLC ਸਿਸਟਮ (ਵਾਟਰਸ ਕੰਪਨੀ, ਮਿਲਫੋਰਡ, MA, USA) ਅਤੇ ਇੱਕ ਫੋਟੋਡਾਇਓਡ ਐਰੇ ਡਿਟੈਕਟਰ ਨਾਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। SDE ਦੇ HPLC ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ, ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ-O-ਗਲੂਕੋਸਾਈਲਸਿਮੀਫੁਗਿਨ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕੋਰੀਆ ਪ੍ਰਮੋਸ਼ਨ ਇੰਸਟੀਚਿਊਟ ਫਾਰ ਟ੍ਰੈਡੀਸ਼ਨਲ ਮੈਡੀਸਨ ਇੰਡਸਟਰੀ (ਗਯੋਂਗਸਾਨ, ਕੋਰੀਆ) ਤੋਂ ਖਰੀਦਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇਸਕਿੰਟ-O-ਗਲੂਕੋਸਿਲਹਾਮੌਡੋਲ ਅਤੇ 4′-O-β-ਡੀ-ਗਲੂਕੋਸਿਲ-5-O-ਮਿਥਾਈਲਵਿਸਾਮਿਨੋਲ ਨੂੰ ਸਾਡੀ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਦੇ ਅੰਦਰ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸਪੈਕਟ੍ਰਲ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਪਛਾਣਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ NMR ਅਤੇ MS ਦੁਆਰਾ।

SDE ਨਮੂਨੇ (0.1 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ) ਨੂੰ 70% ਈਥੇਨੌਲ (10 ਮਿ.ਲੀ.) ਵਿੱਚ ਭੰਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫਿਕ ਵੱਖਰਾਕਰਨ ਇੱਕ XSelect HSS T3 C18 ਕਾਲਮ (4.6 × 250 ਮਿਲੀਮੀਟਰ, 5μm, ਵਾਟਰਸ ਕੰਪਨੀ, ਮਿਲਫੋਰਡ, MA, USA)। ਮੋਬਾਈਲ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ 1.0 mL/ਮਿੰਟ ਦੀ ਪ੍ਰਵਾਹ ਦਰ 'ਤੇ ਪਾਣੀ (B) ਵਿੱਚ ਐਸੀਟੋਨਾਈਟ੍ਰਾਈਲ (A) ਅਤੇ 0.1% ਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ ਸ਼ਾਮਲ ਸੀ। ਇੱਕ ਮਲਟੀਸਟੈਪ ਗਰੇਡੀਐਂਟ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ: 5% A (0 ਮਿੰਟ), 5–20% A (0–10 ਮਿੰਟ), 20% A (10–23 ਮਿੰਟ), ਅਤੇ 20–65% A (23–40 ਮਿੰਟ)। ਖੋਜ ਤਰੰਗ-ਲੰਬਾਈ 210–400 nm 'ਤੇ ਸਕੈਨ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ 254 nm 'ਤੇ ਰਿਕਾਰਡ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਟੀਕੇ ਦੀ ਮਾਤਰਾ 10.0 ਸੀ।μL. ਤਿੰਨ ਕ੍ਰੋਮੋਨਾਂ ਦੇ ਨਿਰਧਾਰਨ ਲਈ ਮਿਆਰੀ ਘੋਲ 7.781 mg/mL (ਪ੍ਰਾਈਮ-O-ਗਲੂਕੋਸਾਈਲਸਿਮੀਫਿਊਜਿਨ), 31.125 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਮਿਲੀਲੀਟਰ (4′-O-β-ਡੀ-ਗਲੂਕੋਸਿਲ-5-O-ਮਿਥਾਈਲਵਿਸੈਮਿਨੋਲ), ਅਤੇ 31.125 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਮਿਲੀਲੀਟਰ (ਸਕਿੰਟ-O-ਗਲੂਕੋਸਿਲਹਾਮੌਡੋਲ) ਨੂੰ ਮੀਥੇਨੌਲ ਵਿੱਚ ਅਤੇ 4°C 'ਤੇ ਰੱਖਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

2.3. ਸਾੜ ਵਿਰੋਧੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣਇਨ ਵਿਟਰੋ

2.3.1. ਸੈੱਲ ਕਲਚਰ ਅਤੇ ਨਮੂਨਾ ਇਲਾਜ

RAW 264.7 ਸੈੱਲ ਅਮਰੀਕਨ ਟਾਈਪ ਕਲਚਰ ਕਲੈਕਸ਼ਨ (ATCC, Manassas, VA, USA) ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ 1% ਐਂਟੀਬਾਇਓਟਿਕਸ ਅਤੇ 5.5% FBS ਵਾਲੇ DMEM ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਉਗਾਏ ਗਏ ਸਨ। ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 37°C 'ਤੇ 5% CO2 ਦੇ ਨਮੀ ਵਾਲੇ ਮਾਹੌਲ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਤਾਜ਼ੇ DMEM ਮਾਧਿਅਮ ਨਾਲ ਬਦਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ 1 'ਤੇ ਲਿਪੋਪੋਲੀਸੈਕਰਾਈਡ (LPS, ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ ਕੈਮੀਕਲ ਕੰਪਨੀ, ਸੇਂਟ ਲੂਈਸ, MO, USA) ਨੂੰ ਲਿਪੋਪੋਲੀਸੈਕਰਾਈਡ (LPS, ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ ਕੈਮੀਕਲ ਕੰਪਨੀ, ਸੇਂਟ ਲੂਈਸ, MO, USA) ਨਾਲ ਬਦਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।μg/mL ਨੂੰ SDE (200 ਜਾਂ 400) ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਜਾਂ ਗੈਰਹਾਜ਼ਰੀ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀμg/mL) ਵਾਧੂ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ।

2.3.2. ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ (NO), ਪ੍ਰੋਸਟਾਗਲੈਂਡਿਨ E2 (PGE2), ਟਿਊਮਰ ਨੈਕਰੋਸਿਸ ਫੈਕਟਰ ਦਾ ਨਿਰਧਾਰਨ-α(ਟੀ.ਐਨ.ਐਫ.-α), ਅਤੇ ਇੰਟਰਲਿਊਕਿਨ-6 (IL-6) ਉਤਪਾਦਨ

ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਇਲਾਜ SDE ਨਾਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ LPS ਨਾਲ ਉਤੇਜਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਗ੍ਰੀਸ ਰੀਐਜੈਂਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਾਈਟ੍ਰਾਈਟ ਨੂੰ ਮਾਪ ਕੇ NO ਉਤਪਾਦਨ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ [12]. ਸੋਜਸ਼ ਵਾਲੇ ਸਾਇਟੋਕਾਈਨਜ਼ PGE2, TNF- ਦਾ સ્ત્રાવα, ਅਤੇ IL-6 ਨੂੰ ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਹਦਾਇਤਾਂ ਅਨੁਸਾਰ ELISA ਕਿੱਟ (R&D ਸਿਸਟਮ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। NO ਅਤੇ ਸਾਇਟੋਕਾਈਨ ਉਤਪਾਦਨ 'ਤੇ SDE ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਵਾਲੈਕ ਐਨਵਿਜ਼ਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ 540 nm ਜਾਂ 450 nm 'ਤੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।™ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਰੀਡਰ (ਪਰਕਿਨਐਲਮਰ)।

2.4. ਐਂਟੀਓਸਟੀਓਆਰਥਾਈਟਿਸ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣਵੀਵੋ ਵਿੱਚ

2.4.1. ਜਾਨਵਰ

ਨਰ ਸਪ੍ਰੈਗ-ਡੌਲੀ ਚੂਹੇ (7 ਹਫ਼ਤੇ ਪੁਰਾਣੇ) ਸੈਮਟਾਕੋ ਇੰਕ. (ਓਸਾਨ, ਕੋਰੀਆ) ਤੋਂ ਖਰੀਦੇ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ 12-ਘੰਟੇ ਦੇ ਪ੍ਰਕਾਸ਼/ਹਨੇਰੇ ਚੱਕਰ ਦੇ ਨਾਲ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਰੱਖੇ ਗਏ ਸਨ।°C ਅਤੇ% ਨਮੀ। ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਖੁਰਾਕ ਅਤੇ ਪਾਣੀ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਐਡ ਲਿਬਿਟਮ. ਸਾਰੀਆਂ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਨੈਸ਼ਨਲ ਇੰਸਟੀਚਿਊਟ ਆਫ਼ ਹੈਲਥ (NIH) ਦੇ ਦਿਸ਼ਾ-ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਵਿੱਚ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ ਅਤੇ ਡੇਜੇਓਨ ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ (ਡੇਜੇਓਨ, ਕੋਰੀਆ ਗਣਰਾਜ) ਦੀ ਪਸ਼ੂ ਦੇਖਭਾਲ ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਕਮੇਟੀ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਵਾਨਿਤ ਸਨ।

2.4.2. ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ MIA ਦੇ ਨਾਲ OA ਦਾ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋਣਾ।

ਅਧਿਐਨ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਜਾਨਵਰਾਂ ਨੂੰ ਬੇਤਰਤੀਬ ਢੰਗ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਭੇਜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ (ਪ੍ਰਤੀ ਸਮੂਹ)। MIA ਘੋਲ (3 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/50μ0.9% ਖਾਰੇ ਦਾ L) ਸਿੱਧਾ ਸੱਜੇ ਗੋਡੇ ਦੇ ਅੰਦਰੂਨੀ-ਆਰਟੀਕੂਲਰ ਸਪੇਸ ਵਿੱਚ ਕੇਟਾਮਾਈਨ ਅਤੇ ਜ਼ਾਈਲਾਜ਼ੀਨ ਦੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨਾਲ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਅਨੱਸਥੀਸੀਆ ਦੇ ਤਹਿਤ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਬੇਤਰਤੀਬੇ ਨਾਲ ਚਾਰ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਸੀ: (1) ਬਿਨਾਂ MIA ਟੀਕੇ ਦੇ ਖਾਰੇ ਸਮੂਹ, (2) MIA ਟੀਕੇ ਵਾਲਾ MIA ਸਮੂਹ, (3) SDE-ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਸਮੂਹ (200 mg/kg) MIA ਟੀਕੇ ਵਾਲਾ, ਅਤੇ (4) ਇੰਡੋਮੇਥਾਸਿਨ- (IM-) ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਸਮੂਹ (2 mg/kg) MIA ਟੀਕੇ ਵਾਲਾ। ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ 4 ਹਫ਼ਤਿਆਂ ਲਈ MIA ਟੀਕੇ ਤੋਂ 1 ਹਫ਼ਤਾ ਪਹਿਲਾਂ SDE ਅਤੇ IM ਨਾਲ ਜ਼ੁਬਾਨੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਗਏ SDE ਅਤੇ IM ਦੀ ਖੁਰਾਕ ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ ਨਿਯੁਕਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਲੋਕਾਂ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਸੀ [10,13,14].

2.4.3. ਹਿੰਦਪਾ ਭਾਰ-ਬੇਅਰਿੰਗ ਵੰਡ ਦੇ ਮਾਪ

OA ਇੰਡਕਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਪਿਛਲੇ ਪੰਜਿਆਂ ਦੀ ਭਾਰ ਚੁੱਕਣ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਵਿੱਚ ਮੂਲ ਸੰਤੁਲਨ ਵਿਘਨ ਪਿਆ। ਭਾਰ ਚੁੱਕਣ ਦੀ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਇਨਕੈਪੇਸੈਂਟੈਂਸ ਟੈਸਟਰ (ਲਿੰਟਨ ਇੰਸਟਰੂਮੈਂਟੇਸ਼ਨ, ਨੌਰਫੋਕ, ਯੂਕੇ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਮਾਪਣ ਵਾਲੇ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਪਿਛਲੇ ਅੰਗ ਦੁਆਰਾ ਲਗਾਏ ਗਏ ਭਾਰ ਚੁੱਕਣ ਦੀ ਸ਼ਕਤੀ ਨੂੰ 3 ਸਕਿੰਟ ਦੀ ਮਿਆਦ ਵਿੱਚ ਔਸਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਭਾਰ ਵੰਡ ਅਨੁਪਾਤ ਦੀ ਗਣਨਾ ਹੇਠ ਲਿਖੇ ਸਮੀਕਰਨ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ: [ਸੱਜੇ ਪਿਛਲੇ ਅੰਗ 'ਤੇ ਭਾਰ/(ਸੱਜੇ ਪਿਛਲੇ ਅੰਗ 'ਤੇ ਭਾਰ + ਖੱਬੇ ਪਿਛਲੇ ਅੰਗ 'ਤੇ ਭਾਰ)] × 100 [15].

2.4.4. ਸੀਰਮ ਸਾਇਟੋਕਾਈਨ ਦੇ ਪੱਧਰਾਂ ਦੇ ਮਾਪ

ਖੂਨ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ 1,500 ਗ੍ਰਾਮ 'ਤੇ 4°C 'ਤੇ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ; ਫਿਰ ਸੀਰਮ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਤੱਕ −70°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। IL-1 ਦੇ ਪੱਧਰβ, IL-6, TNF-α, ਅਤੇ ਸੀਰਮ ਵਿੱਚ PGE2 ਨੂੰ ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਹਦਾਇਤਾਂ ਅਨੁਸਾਰ R&D ਸਿਸਟਮ (ਮਿਨੀਏਪੋਲਿਸ, MN, USA) ਤੋਂ ELISA ਕਿੱਟਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ।

2.4.5. ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਮਾਤਰਾਤਮਕ RT-PCR ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ

ਕੁੱਲ RNA ਨੂੰ TRI reagent® (ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ, ਸੇਂਟ ਲੂਈਸ, MO, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਗੋਡਿਆਂ ਦੇ ਜੋੜਾਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਤੋਂ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ, cDNA ਵਿੱਚ ਉਲਟਾ-ਲਿਪਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ SYBR ਹਰੇ (ਐਪਲਾਈਡ ਬਾਇਓਸਿਸਟਮ, ਗ੍ਰੈਂਡ ਆਈਲੈਂਡ, NY, USA) ਨਾਲ TM One Step RT PCR ਕਿੱਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ PCR-ਐਂਪਲੀਫਾਈ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਮਾਤਰਾਤਮਕ PCR ਐਪਲਾਈਡ ਬਾਇਓਸਿਸਟਮ 7500 ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ PCR ਸਿਸਟਮ (ਐਪਲਾਈਡ ਬਾਇਓਸਿਸਟਮ, ਗ੍ਰੈਂਡ ਆਈਲੈਂਡ, NY, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਕ੍ਰਮ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਬ-ਕ੍ਰਮ ਸਾਰਣੀ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਏ ਗਏ ਹਨ।1. ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਹਦਾਇਤਾਂ (ਐਪਲਾਈਡ ਬਾਇਓਸਿਸਟਮ, ਫੋਸਟਰ, ਸੀਏ, ਯੂਐਸਏ) ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਵਾਲੇ ਟਾਕਮੈਨ® ਯੂਨੀਵਰਸਲ ਪੀਸੀਆਰ ਮਾਸਟਰ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨਾਲ ਸੈਂਪਲ ਸੀਡੀਐਨਏ ਦੇ ਸਮੂਹ ਅਤੇ GAPDH ਸੀਡੀਐਨਏ ਦੀ ਬਰਾਬਰ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। 40 ਚੱਕਰਾਂ ਲਈ ਪੀਸੀਆਰ ਸਥਿਤੀਆਂ 50°C 'ਤੇ 2 ਮਿੰਟ, 94°C 'ਤੇ 10 ਮਿੰਟ, 95°C 'ਤੇ 15 ਸਕਿੰਟ, ਅਤੇ 60°C 'ਤੇ 1 ਮਿੰਟ ਸਨ। ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਹਦਾਇਤਾਂ ਅਨੁਸਾਰ, ਟਾਰਗੇਟ ਜੀਨ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਤੁਲਨਾਤਮਕ Ct (ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪਲਾਟ ਅਤੇ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਕਰਾਸ-ਪੁਆਇੰਟ 'ਤੇ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡ ਚੱਕਰ ਨੰਬਰ) ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।

ਐਫ.ਓ.ਬੀ. ਕੀਮਤ:US $0.5 - 9,999 / ਟੁਕੜਾ

ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਆਰਡਰ ਮਾਤਰਾ:100 ਟੁਕੜੇ/ਟੁਕੜੇ

ਸਪਲਾਈ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ:10000 ਟੁਕੜਾ/ਪੀਸ ਪ੍ਰਤੀ ਮਹੀਨਾ